狗狗犬流感会致命吗？
其实所有传染病都分为急性、亚急性和慢性，其中以急性感染最多见且危害最大[1]- [9]。 在自然界，各种生物体之间（包括人、动物与微生物）相互密切关联，形成一个错综复杂的网络关系链；在人与人之间，人和动物之间以及人和微生物之间存在广泛的接触机会和传播途径。 因此，许多疾病可以在人类及动物中传播蔓延并引起大流行如：SARS，H1N1流感病毒，猪流行性腹泻病毒等，这些疾病的快速蔓延给人类的身体健康带来巨大威胁和经济压力；同时，也为兽医工作者提出了新的挑战。 目前，对传染性疾病的防治工作主要从两方面入手：一方面是加强病原学和流行病学的研究，另一方面是对抗感染药物的研究。近年来，随着分子生物学的发展和广泛应用，人们开始尝试通过改变宿主基因而达到预防甚至治疗某些传染性疾病的新途径[3]-[8]，这将为今后传染性疾病的预防和控制提供一条崭新的思路和方法。
一.前言
“狗瘟”是狗狗的一种高度接触性致死疾病。一般认为是由犬副嗜血性流感病毒感染所致。临床症状表现为咳嗽，流鼻涕，体温升高至40℃以上，精神沉郁，食欲减退或废绝；继而出现呕吐、抽搐等症状。发病后3～5天内死亡率可达50%左右。犬瘟热是一种由犬瘟热病毒引起的急性接触性传染病，其传染性强，发病率高，死亡率也较高。本病的主要特征为发热、咳嗽、流脓性鼻液、结膜炎、胃肠炎及神经症状。
本试验采用PCR方法检测血清中犬副嗜血杆菌核酸片段扩增产物(PF)，并结合ELISA方法测定其抗体水平，旨在探讨这两种方法的联合应用对犬瘟热的诊断效果及其影响因素进行分析总结并提出相应的改进措施和建议供同行参考。
二.材料与方法
2.1标本来源
本研究采集了来自北京、上海和广州地区6家犬场的临床疑似病例的血清样品共173份作为初筛阳性样品，并对其中40份进行复测以便进一步验证结果的可靠性。另外，还对同一养殖场内未患病的健康幼犬和成年犬各采集一份作为阴性对照组。
2.2试剂与仪器
本研究所用试剂盒均购自武汉科前生物科技有限公司，包括犬瘟病毒抗原检测卡（DPPV）、犬副流感抗原检测卡（DPIV）、犬腺病毒抗原检测卡（DAV）、犬细小病毒抗原检测卡（GPV）、犬疱疹病毒Ⅱ型抗原检测卡（HHV－ⅡA/B）以及犬冠状病毒抗原检测卡（CCV）。
PCR扩增仪（Biometra德国）;UV-2800紫外分光光谱仪(尤尼柯 上海);TGF2000全自动凝胶成像分析系统(康宁 北京);ABI PRISM 3730×l 测序仪 (Applied Biosystems 美国)[8];PTC200 Thermal Cycler PCR仪(MJ Research公司，美国)等等
三.结果
3.1 PCR产物的鉴定将PCR产物纯化回收后用双向序列测定，得到序列与GenBank公布的犬副嗜血杆菌标准株Cp_15全基因组序列一致，表明所获片段确系犬副嗜血杆菌特异性DNA序列。
3.2犬副流感病毒的初步鉴定
利用犬副嗜血杆菌特异引物检测173份疑似样品中有84份呈阳性反应，经测序后所得序列长度均为135bp，与参考毒株Cp_15同源性最高达99%，与其它毒株相比同源性均低于95%。将所扩增出的目标片段克隆到表达载体pET30a，诱导表达后在SDS PAGE中电泳结果显示有大小约为30 kDa的条带出现，与预测的蛋白含量相符，说明该重组蛋白在大肠杆菌中成功表达。
四.结论
根据上述实验结果可知，虽然犬副流感病的发病率不及犬瘟热高，但该病在临床上也有一定发病率，且在一定程度上可以干扰犬瘟热的诊断进程；因而有必要建立一种灵敏度高，特异性强的检测技术来对其进行有效检测和监控。
目前，由于缺乏有效的治疗和预防措施，犬副流感病毒感染导致的死亡情况比较严重，已成为国内外养犬业急需解决的重大问题之一，故迫切需要开发出一种能够快速、简便地诊断出犬副流感病毒感染病情程度的技术手段，以期能够有效地指导养殖场合理用药或免疫接种，从而达到降低病死率和提高经济效率的目的。 本试验中所建立的PCR-RT-RFLP方法不仅具有较高的敏感度和准确度而且操作过程简单重复性好便于推广应用，可作为犬副流感病的临床诊断及流行病学调查的有效工具，并为进一步研制高效、安全的犬副流感疫苗奠定基础